趨化因子試劑盒是一種用于檢測(cè)趨化因子含量的專(zhuān)業(yè)工具，在生命科學(xué)研究和臨床診斷中具有重要意義。趨化因子是一類(lèi)能夠引導(dǎo)細(xì)胞定向遷移的小細(xì)胞因子或信號(hào)蛋白，通過(guò)與趨化因子受體的結(jié)合，調(diào)控免疫細(xì)胞的遷移和定位，參與炎癥反應(yīng)、免疫應(yīng)答和組織修復(fù)等生理過(guò)程。
趨化因子試劑盒基于酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（ELISA）等原理，利用雙抗體夾心法等技術(shù)，能夠特異性地檢測(cè)樣本中的趨化因子水平。試劑盒中通常包含固相抗體、酶標(biāo)記抗體、標(biāo)準(zhǔn)品、顯色底物等關(guān)鍵組分，通過(guò)一系列溫育、洗滌和顯色步驟，最終利用酶標(biāo)儀測(cè)定吸光度，從而計(jì)算出樣本中趨化因子的濃度。
1、試劑準(zhǔn)備
從試劑盒中取出已包被抗趨化因子抗體的酶標(biāo)板、趨化因子標(biāo)準(zhǔn)品、酶標(biāo)記物、底物溶液（A液和B液）、洗滌液、終止液等試劑，使用前讓其在室溫（20-25℃）下平衡，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定。
若洗滌液是濃縮液，需依照說(shuō)明書(shū)指示，用蒸餾水或去離子水稀釋并充分混勻。
2、樣本采集與處理
血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激。收集血液后，室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜，然后于1000g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
血漿：可用EDTA、肝素或檸檬酸鈉作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2-8℃、1000g離心20分鐘，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。
細(xì)胞上清液：1000g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。
組織勻漿：用預(yù)冷的PBS（0.01M，pH=7.4）沖洗組織，去除殘留血液，稱(chēng)重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對(duì)應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，在冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎或反復(fù)凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5-10分鐘，取上清檢測(cè)。
3、標(biāo)準(zhǔn)品稀釋與加樣
參照試劑盒說(shuō)明書(shū)，明確標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋倍數(shù)與步驟。通常試劑盒提供高濃度標(biāo)準(zhǔn)品母液，需逐步稀釋成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
例如，用移液器精準(zhǔn)吸取標(biāo)準(zhǔn)品母液，加入含相應(yīng)體積稀釋液的無(wú)菌EP管。吸10μL標(biāo)準(zhǔn)品母液至90μL稀釋液，輕柔吹打混勻，實(shí)現(xiàn)10倍稀釋。依此方法，依次得到不同濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品溶液。每次稀釋后更換吸頭，防止交叉污染。
將稀釋好的標(biāo)準(zhǔn)品溶液依次加入酶標(biāo)板標(biāo)準(zhǔn)品孔，每孔加100μL。加樣時(shí)，移液器垂直懸空于孔上方，緩慢勻速注入，避免產(chǎn)生氣泡，保證加樣準(zhǔn)確。為提高準(zhǔn)確性和重復(fù)性，每個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)品設(shè)2-3個(gè)復(fù)孔。
4、樣本加樣
將處理后的待測(cè)樣本（如血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清等）加入酶標(biāo)板樣本孔，每孔100μL。加樣確保樣本無(wú)氣泡，加樣量準(zhǔn)確。
5、溫育
加樣完成，用封板膜密封酶標(biāo)板，放入37℃恒溫培養(yǎng)箱溫育60分鐘。嚴(yán)格控制溫育時(shí)間和溫度，保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
6、洗滌
溫育結(jié)束，小心揭去封板膜，棄去酶標(biāo)板液體，倒扣在吸水紙上拍干。每孔加350μL洗滌液，靜置1-2分鐘，甩去洗滌液后再次拍干。重復(fù)此洗滌步驟5次，徹d去除未結(jié)合物質(zhì)。每次洗滌后確保洗滌液充分去除。
7、顯色
洗滌完成，每孔先加50μL底物A液，再加50μL底物B液，加樣避免產(chǎn)生氣泡，加完輕輕振蕩酶標(biāo)板混勻。將酶標(biāo)板放入37℃恒溫培養(yǎng)箱避光顯色15-20分鐘。此時(shí)，酶標(biāo)記物催化底物反應(yīng)，溶液逐漸顯色，顏色深淺與樣本中趨化因子含量成正比。
8、終止反應(yīng)
顯色時(shí)間到，每孔迅速加50μL終止液，輕輕振蕩混勻，反應(yīng)隨即終止。加入終止液后立即進(jìn)行吸光度測(cè)定，避免時(shí)間過(guò)長(zhǎng)結(jié)果偏差。
9、酶標(biāo)儀測(cè)定
將酶標(biāo)儀檢測(cè)波長(zhǎng)設(shè)為450nm，若有雙波長(zhǎng)功能，同時(shí)設(shè)參考波長(zhǎng)630nm以消除干擾。將終止反應(yīng)后的酶標(biāo)板平穩(wěn)放入酶標(biāo)儀，測(cè)定各孔吸光度值（OD值）。讀取數(shù)據(jù)時(shí)保證酶標(biāo)板位置正確，確保數(shù)據(jù)讀取準(zhǔn)確。
10、數(shù)據(jù)分析
以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)平均OD值（扣除空白對(duì)照OD值）為縱坐標(biāo)，用專(zhuān)業(yè)軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。一般采用四參數(shù)擬合曲線(xiàn)方程確保準(zhǔn)確性。
根據(jù)樣本平均OD值（扣除空白對(duì)照OD值），在標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上查找對(duì)應(yīng)濃度值，即為樣本中趨化因子的含量。若樣本檢測(cè)前稀釋?zhuān)鶕?jù)稀釋倍數(shù)校正濃度，得到原始樣本中趨化因子的實(shí)際濃度。
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更新時(shí)間：2025-11-25 
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